Comprehensive typing of HLA-DPBL alleles by polymerase chain
reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP)
Dharmendra P.S. Sengar
Nancy Hampton
Rose Goldstein
Ameet S. Sengar
Departments of Pathology and Laboratory Medicine, and Medicine,
Ottawa General Hospital; University of Ottawa Health Sciences
Centre; and Health Canada, Ottawa, Ontario
(Original manuscript submitted 7/4/95; received in revised form
31/7/95; accepted 10/8/95)
Résumé
Le typage complet de 53 allèles HLA-DBP1 a
été effectué à l'aide de la
méthode PCR-RFLP en se servant de 78 échantillons
d'ADN définis au préalable par une analyse PCR-SSOP
(14 rétrospectifs et 64 prospectifs). L'amplification de
l'exone du gène HLA-DBP1 a généré un
produit de PCR de 294 nt, dont la carte de restriction a permis de
distinguer les divers allèles DBP1 sous étude. Ainsi,
une série de 13 endonucléases (RsaI, Sau96I, BsrBI,
DdeI, BsaJI, BssHII, ScaI, SacI, BbvI, BsgI, FokI, Bsp1286I et BstUI) a
produit des profils de RFLP uniques et caractéristiques pour
chaque paire d'allèles, à l'exception toutefois de 2
paires d'allèles (DBP1*3901/4001 et DBP1*4901/5301) qui
ont nécessité une digestion supplémentaire
avec l'enzyme AciI afin de les discerner. (AciI permet de
différencier DPB1*4901 de 5301.) Les profils de RFLP
caractéristiques et uniques de 21 allèles DPB1,
obtenus à partir d'échantillons d'ADN
caractérisés à l'aide de la méthode
PCR-SSOP, ont été vérifiés. Parmi les
1,378 profils hétérozygotes possibles, 69 paires et
un triplet ont été identifiés qui donneraient
des profils de RFLP identiques. Toutefois, en sélectionnant
dans la série d'endonucléases mentionnées ci-haut, on a réussi à distinguer tous ces
hétérozygotes en choisissant des digestions doubles
appropriées, la seule exception étant la paire
DPB1*3901/5301 qu'on ne peut différencier ainsi de la paire
4001/4901. La méthode PCR-RFLP demeure donc une
méthode précise de l'analyse allélique de
DPB1.
Clin Invest Med 1995; 18 (6) : 465-472
Table des matières : MCE vol. 18, no. 6
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