Microbial surveillance of human islet isolation, in vitro culture, and cryopreservation

Jonathan R.T. Lakey
Ray V. Rajotte
Garth L. Warnock

From the Departments of Surgery and Medicine and the Surgical-Medical Research Institute, University of Alberta, Edmonton, Alberta

(Original manuscript submitted 20/6/94, received in revised form 26/1/95; accepted 2/2/95)

Résumé

Nous avons évalué la contamination microbienne durant l'isolement et la préservation d'îilots de Langerhans dans une banque de tissu à basse température. Les îilots ont été isolés de pancréas de 117 donneurs d'organes et cryopréservés. Dans un premier groupe de 47 échantillons, des cultures ont été obtenues après dégel du tissu. Nous avons retrouvé des Enterobacter cloacae (n = 4) et des bacilles gram-négatifs (n = 9) pour un taux de culture positive de 27.6 %. Nous n'avons pas pu déterminer la source de la contamination puisque les cultures ont été obtenues à la fin des manipulations. Sur les 70 pancréas suivants, nous avons cultivé de façon prospective le matériel prélevé à différentes étapes: 1) le milieu de transport des pancréas; 2) le milieu de perfusion à la collagénase; 3) le milieu après dissociation tissulaire; 4) après purification; 5) après 6-48 h de culture in vitro; 6) après le dégel; 7) après dilution dans un agent cryoprotecteur; 8) après les 48 h de culture finale in vitro. Le liquide de transport a été contaminé avec des gram-négatifs (n = 6), gram-positifs (n = 5), et des levures (n = 2) pour un taux de contamination initial de 19 %. Ces contaminants étaient retrouvés dans 9 % des pancréas provenant de notre programme local vs. dans 26 % des pancréas provenant d'autres régions. Les contaminants dans les étapes subséquentes étaient de 10 % (étape 2), 9 % (étape 3) et dans seulement 3 % des cultures positives étaient retrouvées à l'isolation des îlots (étape 4), et 0 % après la culture initiale (étape 5). Parmi les pancréas qui étaient initialement stériles, de nouveaux contaminants ont été identifiés à l'étape 2 (12 %) et à l'ètape 3 (8 %); ceux-ci ont disparu dans les étapes ultérieures. La cryopréservation n'a pas facilité l'apparition microbienne à l'étape 6 mais 2 cultures positives sont apparues aux étapes 7 et 8. Nous concluons que la surveillance microbiologique de l'isolation des îlots humains et des banques tissulaires facilite l'identification de la source de contamination. Une contamination significative ou précoce dans le procédé d'isolation devient indédectable à la fin de la purification et cryopréservation.

Clin Invest Med 1995; 18 (3) : 168-176

Table des matières : MCE vol. 18, no. 3

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